黄瓜花叶病毒丹参株系外壳蛋白基因的克隆和序列分析The Cloning and Sequence Analysis of Coat Protein Gene of Cucumber Mosaic Virus Isolate from Salvia Miltorrhiza Bge
吴志明,温春秀,彭卫欣,吴智红,王云逸,谢晓亮
摘要(Abstract)：
从河北安国具有典型花叶症状的大田丹参叶片中分离到病毒病原 ,经过生物学接种、电镜观察和酶联免疫吸附测定表明该离物与CMV有较近的亲缘关系 (记为CMV DS)。从叶片中提取了该病毒的总RNA ,按照CMV外壳蛋白 (CP)基因前后保守区序列 ,设计合成了 1对特异引物 ,采用RT PCR法扩增了 780bp的全长CP基因的cDNA序列 ,将其克隆到pGEM T载体上 ,并进行序列分析。结果重组克隆序列长为 778bp ,含 1个开放阅读框架 (ORF) ,长度为 65 7nt,编码 2 1 8个氨基酸组成的蛋白。与国内外报道的CMV株系序列比较 ,CMV DS和亚组Ⅰ株系的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性为 93 3%～ 99 4%和95 9%～ 1 0 0 % ;而与亚组Ⅱ株系的核苷酸和氨基酸序列同源性仅为为 78 4%～ 79 0 %和81 2 %～ 83 0 % ,表明CMV DS与CMV亚组Ⅰ的株系较亚组Ⅱ株系同源关系更密切 ,将其划归为CMV亚组IB中 ,这是首次在丹参上发现的CMV株系。
关键词(KeyWords)： 丹参;黄瓜花叶病毒;外壳蛋白基因;克隆;序列分析
基金项目(Foundation): 河北省科技攻关项目 ( 0 3 2 2 0 111)资助
作者(Author): 吴志明,温春秀,彭卫欣,吴智红,王云逸,谢晓亮
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DOI: 10.16318/j.cnki.hbnykx.2004.02.006
参考文献(References)：
- [1]丁远杰,吴志明,谢晓亮,等.丹参病毒病原的鉴定研究[J].中草药,2003,34(12):1136-1139.
- [2]PalukaitisP ,RoossinckMJ,DietzgenRG ,etal.Cucumbermosaicvirus[J].Advancevirusresearch,1992,41:281-348.
- [3]WahyuniWS ,DietzgenRG .SerologicalandbiologicalvariationbetweenandwithinsubgroupⅠandⅡstrainsofcucumbermosaicvirus[J].Plantpathology,1992,41(4):282-297.
- [4]吴志明,朱水芳,田文会,张成良.马铃薯卷叶病毒张家口分离物外壳蛋白和17K蛋白基因的克隆和序列分析[J].河北农业大学学报,2000,25(4):62-66.
- [5]徐平东,周仲驹,林奇英,谢联辉.黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ和Ⅱ分离物外壳蛋白基因的序列分析与比较[J].病毒学报,1999,15(2):164-170.
- [6]胡天华,吴 琳,刘 玮,等.黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因的cDNA克隆和全序列测定比较[J].科学通报,1989,34:1652-1654.
- [7]叶 寅,徐雷新,田 波.一个黄瓜花叶病毒强株系外壳蛋白基因的合成、克隆、序列分析和表达[J].科学通报,1991,36:1340-1344.
- [8]郭东川,乔利亚,方荣祥.利用PCR技术克隆黄瓜花叶病毒的外壳蛋白基因[J].微生物学报,1993,33:233-235.
- [9]徐平东,谢联辉.我国黄瓜花叶病毒及其病害研究进展[A].见:第一次全国植物病毒与病毒病防治研究学术讨论会论文集[C].北京:中国农业科技出版社,1997.13-22.
- [10]HolcombGEandValverdeRA .NaturalinfectionofSalviauliginosawithCucumberMosaicCucumovirus[J].HortScience,1998,33(7):1215-1216.
- [11]WangXF ,PeiMY ,MaDF .IdentificationofCuanhongmosaicvirus[J].ActaPhytopathologicalSinica,1985,15:36-37.
- [12]RoossinckMJ ,ZhangL ,andHellwaldKH .Rearrangementinthe5!@nontranslatedregionphylogeneticalalysesofcu cumbermsaicvirusRNA 3indicateradialevolutionofthreesubgroups[J].Journalofvirology,1999,8:6752-6758.
- [13]GonsalvesD ,SlightomJL .Coatprotein mediatedprotection:analysisoftransgenicplantsforresistanceinavarietyofcrops[J].Semin.Virol.,1993,4:397-405.
- [14]朱俊华,竺晓平,温孚江,等.马铃薯Y病毒衣壳蛋白基因片断长度对RNA介导的抗病性的影响[J].中国科学(C辑),2004,34(1):23-30.
- [15]冯德江,刘 翔,孟 昆,等.CP基因的修饰引起转基因的沉默及其介导的抗性[J].科学通报,2003,48(12):1308-1314.